ⅠNasam nukleatipengantar
Asam nukleat dibagi menjadi asam deoksiribonukleat (DNA) dan asam ribonukleat (RNA), di antaranya RNA dibagi menjadi RNA ribosom (rRNA), messenger RNA (mRNA) dan transfer RNA (tRNA) sesuai dengan fungsinya yang berbeda.DNA terutama terkonsentrasi di nukleus, mitokondria dan kloroform, sedangkan RNA terutama didistribusikan di sitoplasma.Sebagai bahan dasar ekspresi gen, ekstraksi asam nukleat memainkan peran yang sangat penting dalam penelitian biologi molekuler dan diagnosis molekuler klinis.Konsentrasi dan kemurnian ekstraksi asam nukleat akan secara langsung mempengaruhi PCR selanjutnya, sequencing, konstruksi vektor, pencernaan enzim dan percobaan lainnya.
Ⅱ Metode ekstraksi dan pemurnian asam nukleat
① Metode ekstraksi fenol/kloroform
Ekstraksi fenol/kloroform adalah metode klasik untuk ekstraksi DNA, yang terutama menggunakan dua pelarut organik berbeda untuk mengolah sampel, melarutkan asam nukleat berbasis DNA dalam fase air, lipid dalam fase organik, dan protein di antara kedua fase.Metode ini mempunyai keunggulan biaya rendah, kemurnian tinggi dan efek yang baik.Kerugiannya adalah pengoperasian yang rumit dan waktu yang lama.
② Metode trizol
Metode trizol adalah metode klasik untuk ekstraksi RNA.Metode Trizol dibagi menjadi fase air dan fase organik setelah sentrifugasi dengan kloroform, dimana RNA dilarutkan dalam fase air, fase air dipindahkan ke tabung EP baru, pengendapan diperoleh setelah penambahan isopropanol, dan kemudian pemurnian etanol.Metode ini cocok untuk ekstraksi RNA dari jaringan hewan, sel dan bakteri.
③ Metode pemurnian kolom sentrifugal
Metode pemurnian kolom sentrifugasi dapat mengadsorpsi DNA secara spesifik melalui bahan adsorpsi matriks silikon khusus, sedangkan RNA dan protein dapat lewat dengan lancar, kemudian menggunakan garam tinggi PH rendah untuk menggabungkan asam nukleat, elusi nilai PH tinggi garam rendah untuk memisahkan dan memurnikan asam nukleat.Keunggulannya adalah konsentrasi pemurnian tinggi, stabilitas tinggi, tidak memerlukan pelarut organik, dan biaya rendah.Kerugiannya adalah perlu disentrifugasi langkah demi langkah, lebih banyak langkah operasi.
④ Metode manik magnetik
Metode manik magnet adalah dengan membelah sampel jaringan sel melalui lisat, melepaskan asam nukleat dalam sampel, kemudian molekul asam nukleat secara khusus teradsorpsi pada permukaan manik magnet, sedangkan pengotor seperti protein dan gula tertinggal di dalamnya. cairan.Melalui langkah-langkah pembelahan jaringan sel, pengikatan manik magnetik dengan asam nukleat, pencucian asam nukleat, elusi asam nukleat, dll., akhirnya diperoleh asam nukleat murni.Keunggulannya adalah pengoperasian yang sederhana dan waktu penggunaan yang singkat, tanpa memerlukan langkah sentrifugasi.Ini memiliki persyaratan teknis yang rendah dan dapat mewujudkan operasi otomatis dan massal.Kombinasi spesifik manik magnetik dan asam nukleat menjadikan asam nukleat yang diekstraksi memiliki konsentrasi dan kemurnian tinggi.Kekurangannya adalah harga pasar saat ini yang relatif mahal.
⑤ Metode lain
Selain keempat metode di atas, ada metode perengkahan mendidih, metode garam pekat, metode deterjen anionik, metode ultrasonik dan metode enzimatik, dll.
Ⅲ Jenis ekstraksi asam nukleat
Foregene memiliki platform PCR Langsung terkemuka di dunia, platform Isolasi RNA dua kolom (hanya DNA + RNA saja).Produk utama meliputi kit isolasi DNA/RNA, seri reagen laboratorium molekul reagen PCR dan Direct PCR.
① Ekstraksi RNA total
Sampel ekstraksi RNA total meliputi darah, sel, jaringan hewan, tumbuhan, virus, dll. Kemurnian tinggi dan konsentrasi RNA total yang tinggi dapat diperoleh melalui ekstraksi RNA total, yang dapat digunakan dalam RT-PCR, analisis chip, terjemahan in vitro, kloning molekuler, Dot Blot dan eksperimen lainnya.
Terkait dengan foregeneKit Isolasi RNA
Kit Isolasi RNA Total Hewan--Ekstrak RNA total dengan kemurnian tinggi dan berkualitas tinggi dari berbagai jaringan hewan dengan cepat dan efisien.
Kit Isolasi RNA Total Sel--RNA total yang sangat murni dan berkualitas tinggi dapat diperoleh dari berbagai sel yang dikultur dalam 11 menit.
Kit Isolasi RNA Total Tanaman--Ekstrak RNA total berkualitas tinggi dengan cepat dari sampel tanaman dengan kandungan polisakarida dan polifenol rendah.
Kit Isolasi RNA Virus--Mengisolasi dan memurnikan RNA virus dengan cepat dari sampel seperti plasma, serum, cairan tubuh bebas sel, dan supernatan kultur sel.
② Ekstraksi DNA genom
Sampel ekstraksi DNA genom meliputi tanah, feses, darah, sel, jaringan hewan, tumbuhan, virus, dll. Ekstraksi DNA genom dapat digunakan dalam pencernaan enzim, konstruksi perpustakaan DNA, PCR, persiapan antibodi, analisis hibridisasi Western blot, chip gen, high -pengurutan throughput dan eksperimen lainnya.
Terkait dengan foregeneKit Isolasi DNA
Kit Isolasi DNA Jaringan Hewan--Ekstraksi cepat dan pemurnian DNA genom dari berbagai sumber, seperti jaringan hewan, sel, dll.
Kit Midi DNA Darah (1-5ml)--Dengan cepat memurnikan DNA genom berkualitas tinggi dari darah antikoagulan (1-5ml).
Kit Isolasi DNA Kartu Swab Bukal/FTA--Dengan cepat memurnikan DNA genom berkualitas tinggi dari sampel usap bukal/Kartu FTA.
Kit Isolasi DNA Tanaman--Dengan cepat memurnikan dan mendapatkan DNA genom berkualitas tinggi dari sampel tanaman (termasuk sampel tanaman polisakarida dan polifenol)
③ Ekstraksi plasmid
Plasmid adalah sejenis DNA molekul kecil melingkar dalam sel, yang merupakan pembawa umum untuk rekombinasi DNA.Cara ekstraksi plasmid adalah dengan menghilangkan RNA, memisahkan plasmid dari DNA genom bakteri, serta menghilangkan protein dan pengotor lainnya untuk mendapatkan plasmid yang relatif murni.
Kit Mini Plasmid Umum--Dengan cepat memurnikan DNA plasmid berkualitas tinggi dari bakteri yang ditransformasikan untuk eksperimen biologi molekuler rutin seperti transformasi dan pencernaan enzim
④ Jenis ekstraksi lainnya, ekstraksi miRNA, dll.
Kit Isolasi miRNA hewan--Ekstraksi fragmen RNA kecil dari 20-200nt miRNA, siRNA, snRNA dengan cepat dan efisien dari berbagai jaringan dan sel hewan
Ⅳ Persyaratan hasil ekstraksi dan pemurnian asam nukleats
① Untuk memastikan integritas struktur utama asam nukleat.
② Mengurangi gangguan protein, gula, lipid dan makromolekul lainnya
③ Tidak boleh ada pelarut organik atau ion logam konsentrasi tinggi yang dapat menghambat enzim dalam sampel asam nukleat.
④ Kontaminasi RNA dan asam nukleat lainnya harus dihilangkan saat mengekstraksi DNA, dan sebaliknya.
Waktu posting: 24 November 2022
